总RNA提取试剂盒
产品名称: 总RNA提取试剂盒
英文名称: 总RNA提取试剂盒
产品编号: R1200
产品价格: 0
产品产地: 北京
品牌商标: solarbio
更新时间: 2024-12-05T09:48:33
使用范围: null
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总RNA提取试剂盒
试剂盒组成 | R1200-50 | R1200-100 | 保存 | 有效期 |
裂解液 | 50ml | 100ml | 2-8℃ | 一年 |
漂洗液 | 15ml | 30ml | RT | 一年 |
洗柱液 | 50ml | 100ml | RT | 一年 |
RNasefreeddH2O | 15ml | 30ml | RT | 一年 |
RNasefree吸附柱 | 50个 | 100个 | RT | 一年 |
RNasefree收集管(2ml) | 50个 | 100个 | RT | 一年 |
操作步骤:
1. 样品处理:
a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟, 10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
2. 将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。
4. 2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。
5. 吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。
6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8 12000rpm ℃ 离心2min,弃废液。
7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。
8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。
9. 12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
10. 将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min
即得到RNA。
注意事项:
1,所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2,RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯,需电泳检测。
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参考文献:
《Roles of β-catenin, TCF-4, and survivin in nasopharyngeal carcinoma: correlation with clinicopathological features and prognostic significance》 作者:Pei-Ying Jin, Zi-Hui Zheng, Hong-Jie Lu, Jing Yan, Gui-Hong Zheng, Yuan-Lin Zheng, Dong-Mei Wu and Jun Lu 期刊:Cancer Cell International 影响因子:3.439 PMID:30867651